游戏背景定位在文艺复兴时期的意大利，玩家扮演一名刺客进行刺杀任务，玩家在游戏当中可以建立属于自己的团队，还要面对来自于其他团队的竞争。游戏分为对战模式与剧情模式。除此之外还有多种装备供玩家装备，提升自己以及团队的能力。
在单人任务中，需要玩家去猎杀指定目标，进而从选赏奖励中收到盟友卡片以及新装备。游戏中的武器和防具可用来加强角色的攻击和防御状态，同时也可以改变刺客的外观。至于盟友则是拥有特殊能力的系列着名角色，可以在战斗有利地协助玩家完成任务。
此外，《刺客教条：回忆》搭载了20vs20的多人对战模式，玩家可以自定攻击策略，并共同协同作战来赢得战役。
